Тканеинженерная конструкция для устранения протяженных дефектов уретры
Н. О. Миланов, Р. Т. Адамян, А .В. Васильев, И. Л. Жидков, К. Б. Липский, И. В. Киселев, И. В. Гуляев, Н. А. Суворов ГУ Российский Научный Центр хирургии им. Б. В. Петровского РАМН, Москва, Россия.
Реконструкция органов мочевыделительной системы, в частности, терминального отдела уретры, является одной из наиболее сложных задач восстановительной хирургии, главным образом, вследствие отсутствия оптимального пластического материала, способного противостоять естественным факторам агрессии мочи и достаточного для восполнения ткани при значительных тканевых дефектах. Наиболее полно всем требованиям реципиентной зоны отвечают свободный кожно-фасциальный лучевой аутотрансплантат и, в меньшей степени, свободный лоскут слизистой оболочки щеки. Однако известные недостатки применения данных методик заставляют искать новые подходы к реконструкции уретры при ее протяженных дефектах. Создание трансплантата уретры на основе современных клеточных технологий является принципиально новым методическим подходом в лечении дефектов и пороков развития уретры. Использование в реконструктивной урологии нового трансплантата, состоящего из аутологичных кератиноцитов, выращенных на поверхности биоматрикса, значительно повысит эффективность лечения и позволит избежать многих осложнений, связанных с традиционными методами хирургии. Целью нашей работы стала разработка методики создания тканеинженерной конструкции на основе культивированных эпидермальных кератиноцитов, пригодной для устранения протяженных дефектов уретры. Эксперимент проводили на 15 лабораторных коликах рода Шиншилла. На первом этапе выполняли биопсию кожи с внутренней поверхности ушной раковины. Полученный кожный лоскут в условиях лаборатории измельчали и подвергали ферментативной обработке для отделения эпителиальных клеток. Суспензию эпидермальных кератиноцитов, полученную после ферментативной обработки, осаждали центрифугированием и высевали в пластиковые культуральные флаконы на питательную среду. После формирования во флаконах многослойного эпителиального пласта проводили дестратификацию — процедуру, позволяющую отделить клетки всех слоев, кроме базального. Отделенные клетки «снимали» трипсином и метили мембранным трейсером для последующего их определения при флюорисцентной микроскопии. «Снятые» эпидермальные кератиноциты высевали на поверхность застывшего коллагенового геля, включавшего в себя фибробласты и эндопротезную сетку. Через 3—7 суток, после формирования на поверхности геля многослойного эпителиального пласта, тканевой эквивалент переводили на бессывороточную среду для транспортировки и проводили ее трансплантацию подопытному животному. Таким образом, полученная в процессе культивирования тканеинженерная конструкция состояла из коллагенового геля с заключенными в него эндопротезной сеткой, и фибробластами, и выращенных на его поверхности эпидермальных кератиноцитов.
На 14 сутки после биопсии тканеинженерную конструкцию помещали на фасцию прямой мышцы живота, выполняя, таким образом, префабрикацию будущей неоуретральной пластинки, и укрывали силиконовой пластиной для предотвращения контакта трансплантата с вышележащими тканями.
На 14 сутки после трансплантации полностью приживший трансплантат отсепаровывали от подлежащих тканей, сохраняя питающий мостик, и сворачивали на силиконовой трубке эпителием внутрь. При флюоресцентной микроскопии биоптата неоуретральной трубки через 5—7 дней после ее формирования определяется эпителиальная выстилка, что позволяет судить о полном приживлении тканеинженерной конструкции. В результате проведенной операции получен эквивалент уретральной трубки с эпителиальной выстилкой, по строению приближенной к эпителию нормальной уретры.
Представленная методика создания неоуретры может стать альтернативой традиционным методам уретропластики. Эпителиальная выстилка неоуретральной трубки обладает резистентностью к факторам агрессии мочи, поскольку представлена неороговевающим эпителием. Помимо этого, применение данного метода уретропластики позволяет избежать значительной травматизации донорской области, что характерно для известных видов реконструкции уретры.